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混合研磨儀在苯酚-硫酸法測多糖中的前處理應用探討

日期:2019-08-16 12:02
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摘要:<p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="display:inline-block;position:relative;"> </span></b> </p> <div style="top:0px;left:0px;right:0px;bottom:0px;background-color:rgba(0, 0, 0, 0.4);position:absolute;margin-left:100%;"> </div> <b><img src="http://zt.yizimg.com/ComFolder/498432/image/201803/201803281413417211.png" /><br /> </b> <p> <br /> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><br /> </b> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="font-size:16px;">應用五月开心</span></b><span style="font-size:16px;">:</span><span></span> </p> <p class="MsoNormal" style="text-indent:21.0pt;"> <span style="font-size:16px;">食品藥品、農業、生物、醫學、法醫檢驗等</span><span></span> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="font-size:16px;">測定原理:</span><span></span></b> </p> <p class="MsoNormal" style="text-indent:21.0pt;"> <span style="font-size:16px;">多糖在濃硫酸的作用下先水解成單糖,並迅速脫水生成糖醛衍生物,然後與苯酚生成橙黃色化合物,再以</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/5327894-5563066.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">比色法</span></a></span><span style="font-size:16px;">測定</span><span></span> </p> <p class="MsoNormal"> <b><span style="font-size:16px;">所需試劑:</span><span></span></b> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">1.&nbsp;</span><a href="https://baike.so.com/doc/1155604-1222428.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">濃硫酸</span></a><span style="font-size:16px;">:分析純,</span><span style="font-size:16px;">95.5%</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">2. 80%苯酚</span><span style="font-size:16px;">:80</span><span style="font-size:16px;">克苯酚</span><span style="font-size:16px;">(</span><span style="font-size:16px;">分析純重蒸餾試劑</span><span style="font-size:16px;">)</span><span style="font-size:16px;">加</span><span style="font-size:16px;">20</span><span style="font-size:16px;">克水使之溶解,可置冰箱中避光長期儲存。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">3. 6%苯酚</span><span style="font-size:16px;">:</span><span style="font-size:16px;">臨用前以</span><span style="font-size:16px;">80%</span><span style="font-size:16px;">苯酚配制。</span><span style="font-size:16px;">(</span><strong><span style="font-size:16px;">每次測定均需现配</span></strong><span style="font-size:16px;">)</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">4. 标准</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/5415677-5653822.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">葡聚糖</span></a><span style="font-size:16px;">(Dextran,</span><a href="https://baike.so.com/doc/802234-848645.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">瑞典</span></a><span style="font-size:16px;">Pharmacia),</span></span><span style="font-size:16px;">或分析純葡萄糖。</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">5. 15%</span><a href="https://baike.so.com/doc/5243345-7117737.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">三***</span></a><span style="font-size:16px;">(15%TCA):15克</span><span style="font-size:16px;">TCA</span><span style="font-size:16px;">加</span><span style="font-size:16px;">85</span><span style="font-size:16px;">克水使之溶解,可置冰箱中長期儲存。</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">6. 5%三***</span><span style="font-size:16px;">(5%TCA):25</span><span style="font-size:16px;">克</span><span style="font-size:16px;">TCA</span><span style="font-size:16px;">加</span><span style="font-size:16px;">475</span><span style="font-size:16px;">克水使之溶解,可置冰箱中長期儲存。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">7. 6mol/L 氢氧化钠</span><span style="font-size:16px;">:120</span><span style="font-size:16px;">克分析純氫氧化鈉溶于</span><span style="font-size:16px;">500ml</span><span style="font-size:16px;">水。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">8. 6mol/L 盐酸</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <b><span style="font-size:16px;">操作步驟:</span><span></span></b> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">1.制作標准曲線</span><span style="font-size:16px;">:</span><span style="font-size:16px;">准確稱取標准葡聚糖</span><span style="font-size:16px;">(</span><span style="font-size:16px;">或葡萄糖</span><span style="font-size:16px;">)20mg</span><span style="font-size:16px;">于</span><span style="font-size:16px;">500ml</span><span style="font-size:16px;">容量瓶中,加水至刻度,分別吸取</span><span style="font-size:16px;">0.4</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">0.6</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">0.8</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.0</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.2</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.4</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">1.6</span><span style="font-size:16px;">及</span><span style="font-size:16px;">1.8ml,</span><span style="font-size:16px;">各以蒸餾水補至</span><span style="font-size:16px;">2.0ml</span><span style="font-size:16px;">,然後加入</span><span style="font-size:16px;">6%</span><span style="font-size:16px;">苯酚</span><span style="font-size:16px;">1.0ml</span><span style="font-size:16px;">及</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/1155604-1222428.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">濃硫酸</span></a><span style="font-size:16px;">5.0ml,</span></span><span style="font-size:16px;">搖勻冷卻,沸水浴顯色</span><span style="font-size:16px;">15min</span><span style="font-size:16px;">以後于</span><span style="font-size:16px;">490nm</span><span style="font-size:16px;">測光密度,以</span><span style="font-size:16px;">2.0ml</span><span style="font-size:16px;">水按同樣顯色操作爲空白,橫坐標爲多糖微克數,縱坐標爲光密度值,得標准曲線。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">2.样品含量測定</span><span style="font-size:16px;">:</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">①取樣品</span><span style="font-size:16px;">1</span><span style="font-size:16px;">克</span><span style="font-size:16px;">(</span><span style="font-size:16px;">濕樣</span><span style="font-size:16px;">)</span><span style="font-size:16px;">,置于</span><span style="font-size:16px;">10ml PTFE</span><span style="font-size:16px;">密封離心管中,加入</span><span style="font-size:16px;">5mm</span><span style="font-size:16px;">、</span><span style="font-size:16px;">3mm</span><span style="font-size:16px;">氧化锆磨球,加</span><span style="font-size:16px;">15%TCA</span><span style="font-size:16px;">溶液</span><b><span style="font-size:16px;">(注意</span><span style="font-size:16px;">:</span><span style="font-size:16px;">總的溶液不要超出</span><span style="font-size:16px;">10</span><span style="font-size:16px;">毫升,不要超出離心管的容量</span><span style="font-size:16px;">)</span><span style="font-size:16px;">,</span></b><span style="font-size:16px;">將每個適配器上均裝滿</span><span style="font-size:16px;">6</span><span style="font-size:16px;">個編號的</span><span style="font-size:16px;">10ml</span><span style="font-size:16px;">帶液</span><span style="font-size:16px;">PTFE</span><span style="font-size:16px;">離心管,</span><span style="font-size:16px;">TJ2011</span><span style="font-size:16px;">高通量混合研磨儀設定轉速</span><span style="font-size:16px;">1400rpm</span><span style="font-size:16px;">,研磨時間</span><span style="font-size:16px;">3min</span><span style="font-size:16px;">(視物料軟硬情況定,一般不超過</span><span style="font-size:16px;">5min</span><span style="font-size:16px;">)</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">②離心,轉速</span><span style="font-size:16px;">3000</span><span style="font-size:16px;">轉</span><span style="font-size:16px;">/</span><span style="font-size:16px;">分鍾,共三次。**次</span><span style="font-size:16px;">15</span><span style="font-size:16px;">分鍾,取上清液。後兩次各</span><span style="font-size:16px;">5</span><span style="font-size:16px;">分鍾取上清液到</span><span style="font-size:16px;">25</span><span style="font-size:16px;">毫升錐形比色管中。*後濾液保持</span><span style="font-size:16px;">18</span><span style="font-size:16px;">毫升左右(</span><b><span style="font-size:16px;">TJ2011</span><span style="font-size:16px;">高通量混合研磨儀能量大,速度快,動植物組織會在</span><span style="font-size:16px;">3min</span><span style="font-size:16px;">之内全部打碎,不存在大残渣,直接离心即可,避免了二次轉移产生污染)</span></b> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">③水浴,在向比色管中加入</span><span style="font-size:16px;">2</span><span style="font-size:16px;">毫升</span><span style="font-size:16px;">6mol/L </span><span style="font-size:16px;">鹽酸之後搖勻,在</span><span style="font-size:16px;">96</span><span style="font-size:16px;">℃水浴鍋中水浴</span><span style="font-size:16px;">2</span><span style="font-size:16px;">小時。</span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;">④</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/6730606-6944905.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">定容</span></a></span><span style="font-size:16px;">取樣。水浴後,用流水冷卻後加入</span><span style="font-size:16px;">2</span><span style="font-size:16px;">毫升</span><span style="font-size:16px;">6mol/L </span><span style="font-size:16px;">氫氧化鈉搖勻。定容至</span><span style="font-size:16px;">25</span><span style="font-size:16px;">毫升的容量瓶中。吸取</span><span style="font-size:16px;">0.2 ml</span><span style="font-size:16px;">的樣品液,以蒸餾補至</span><span style="font-size:16px;">2.0ml</span><span style="font-size:16px;">,然後加入</span><span style="font-size:16px;">6%</span><span style="font-size:16px;">苯酚</span><span style="font-size:16px;">1.0ml</span><span style="font-size:16px;">及濃硫酸</span><span style="font-size:16px;">5.0ml,</span><span style="font-size:16px;">搖勻冷卻室溫放置</span><span style="font-size:16px;">20</span><span style="font-size:16px;">分钟以後于</span><span style="font-size:16px;">490nm</span><span style="font-size:16px;">测光密度。每次測定取双样对照。以</span><span><a href="https://baike.so.com/doc/349452-370154.html" target="https://baike.so.com/doc/_blank"><span style="font-size:16px;">標准曲線</span></a></span><span style="font-size:16px;">計算多糖含量。</span><span></span> </p> <p style="text-indent:21.0pt;background:white;"> <span style="font-size:16px;"><span style="display:inline-block;position:relative;"> <div style="top:0px;left:0px;right:0px;bottom:0px;background-color:rgba(0, 0, 0, 0.4);position:absolute;margin-left:100%;"> </div> <img src="http://zt.yizimg.com/ComFolder/498432/image/201803/201803291515917151.png" /></span><br /> </span> </p> <p class="MsoNormal"> <br /> </p>









應用五月开心

食品藥品、農業、生物、醫學、法醫檢驗等

測定原理:

多糖在濃硫酸的作用下先水解成單糖,並迅速脫水生成糖醛衍生物,然後與苯酚生成橙黃色化合物,再以比色法測定

所需試劑:

1. 濃硫酸:分析純,95.5%

2. 80%苯酚:80克苯酚(分析純重蒸餾試劑)20克水使之溶解,可置冰箱中避光長期儲存。

3. 6%苯酚:臨用前以80%苯酚配制。(每次測定均需现配)

4. 标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析純葡萄糖。

5. 15%三***(15%TCA):15克TCA85克水使之溶解,可置冰箱中長期儲存。

6. 5%三***(5%TCA):25TCA475克水使之溶解,可置冰箱中長期儲存。

7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析純氫氧化鈉溶于500ml水。

8. 6mol/L 盐酸

操作步驟:

1.制作標准曲線:准確稱取標准葡聚糖(或葡萄糖)20mg500ml容量瓶中,加水至刻度,分別吸取0.40.60.81.01.21.41.61.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml,然後加入6%苯酚1.0ml濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻,沸水浴顯色15min以後于490nm測光密度,以2.0ml水按同樣顯色操作爲空白,橫坐標爲多糖微克數,縱坐標爲光密度值,得標准曲線。

2.样品含量測定:

①取樣品1(濕樣),置于10ml PTFE密封離心管中,加入5mm3mm氧化锆磨球,加15%TCA溶液(注意:總的溶液不要超出10毫升,不要超出離心管的容量)將每個適配器上均裝滿6個編號的10ml帶液PTFE離心管,TJ2011高通量混合研磨儀設定轉速1400rpm,研磨時間3min(視物料軟硬情況定,一般不超過5min

②離心,轉速3000/分鍾,共三次。**次15分鍾,取上清液。後兩次各5分鍾取上清液到25毫升錐形比色管中。*後濾液保持18毫升左右(TJ2011高通量混合研磨儀能量大,速度快,動植物組織會在3min之内全部打碎,不存在大残渣,直接离心即可,避免了二次轉移产生污染)

③水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 鹽酸之後搖勻,在96℃水浴鍋中水浴2小時。

定容取樣。水浴後,用流水冷卻後加入2毫升6mol/L 氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的樣品液,以蒸餾補至2.0ml,然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分钟以後于490nm测光密度。每次測定取双样对照。以標准曲線計算多糖含量。